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样品的制备：称取各组模拟腌肉制品3g，加12m10.05mol／L的Tris-HCL缓冲溶液，用均浆机在冰域条件下处理lmin，0～4℃条件下以8000r／min的速度离心20min，取过滤液lmL备用。

南方红豆杉是红豆杉科植物南方红豆杉Taxus chinensis （Pilg.）Rehd. var. mairei （Lemee et Levl.）Cheng et L. K. Fu栽培品的干燥枝条。1 仪器与试药仪器:Ultimate3000高效液相色谱仪、Chromeleon7数据处理系统，赛默飞有限公司。

2.4.4 稳定性实验取同一供试品溶液，分别在0，2，4，6，12，24 h按2.1项下色谱条件测定，结果是金松双黄酮的面积的RSD分别为:0.8%，表明金松双黄酮在24 h内稳定（n=6）。2.2 对照品溶液的制备精密称取金松双黄酮对照品18.760 mg至50 mL量瓶中，加入少量DMSO溶解，再加甲醇定容至刻度，配制成浓度为442 gmL-1金松双黄酮对照品母液，并用甲醇逐级稀释成标准曲线溶液。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系删除相关链接：黄酮，液相色谱，金松双黄酮。结果金松双黄酮的检出限为0.01 gmL-1，定量限为 0.02 gmL-1。2.4.3 精密度实验分别取同一供试品溶液，连续进样6次，按照2.1项下色谱条件测定，结果是金松双黄酮峰面积的RSD分别为:2.1%，显示精密度良好（n=6）

如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：氢氧化钠溶液，乙酸铅溶液，硫酸钠溶液，甲基红指示剂。0.9还原糖（以葡萄糖计）换算成淀粉的换算系数。Alcaligenes eutrophus NCIMB11599、H.bluephagenesis TD01等菌株也被证实在发酵液中的葡萄糖浓度为10 g/L，即接近于其半速系数时，菌株可以实现PHAs的高效合成。

此外DSM 545可以将丙酮酸和粗甘油作为共同碳源合成P(3HB-4HB-3HV)，其中生物量达到45 g/L，PHAs产量达到16.7 g/L，PHAs占比36.9%。5级连续发酵罐中的第一个发酵罐用于DSM545菌体数量的培养，其余发酵罐均用于氮元素限制下的PHA积累，PHAs生产速率达到1.85 g/(Lh)(补料中葡萄糖浓度500 g/L)。用于微生物发酵生产低成本PHAs的理想碳源种类丰富，其中来自农业、工业、城市排放和餐余垃圾的废弃物料来源广、体量大，更适用于低成本PHAs的生产。以稀释后的甘蔗糖蜜为碳源，枯草芽孢杆菌B.subtilis RS1经过48 h发酵后生物量达到9.5 g/L，PHAs含量达到生物量的70.5%。

研究团队发现发酵过程及下游分离提取过程中产生的高盐废水在无需预处理的情况下可以再次实现4批次的PHAs发酵。3 展望随着白色污染的加重和石油资源的枯竭，绿色环保材料必将取代传统石油基塑料。

当PHAs产量相同时，高密度发酵所需的发酵体积更少，在人工成本、设备成本和能源消耗上都会有明显降低。秸秆经生物炼制得到的纤维素和木质素同样可以作为PHAs生产的碳源。结果表明控制发酵液中的碳源浓度，有利于提高高密度发酵过程中的PHAs积累量。Ye等同样以氮元素为限制条件实现了H.bluephagenesis TD01发酵过程的精准控制。

在10 L发酵罐中进行的分批发酵实验证明洋葱伯克氏菌Burkholderia cepacia IPT 048和B.sacchari IPT 101可以利用蔗渣水解液发酵生产PHAs，且这两株菌的生物量都达到4.4 g/L，其中PHAs含量分别达到生物量的53%和62%。Shang等发现葡萄糖浓度保持9 g/L时R.eutropha可以表现出优异的PHAs积累能力，而当葡萄糖浓度在812 g/L范围内波动时，PHAs的积累量也会出现2%的波动。因此可以用于开发生产PHA的底盘微生物种类繁多，例如在高碱无灭菌培养基中生产乙醇的耐盐碱马氏芽孢杆菌Bacillus marmarensis、在50℃高温无灭菌培养基中生产乳酸的凝结芽孢杆菌Bacillus coagulans WCP10-4等，以及自然界中存在的嗜酸、嗜碱等嗜极微生物都可以开发用作低成本PHAs发酵生产的底盘微生物。相比于出发菌株，TDHCD-R3生物量提高了41.7%，PHAs产量提高了8.2%。

被认为是未来最有前景的绿色环保材料PHAs由于其高昂的生产成本在推广应用中受到了极大的限制，因此实现低成本PHAs的工业化生产是目前的研究重点。于是Haas等开发了一种含有微滤膜出口的发酵罐，发酵清液经微滤膜出口流出，细胞则被保留在发酵罐中。

Shamala等筛选出一株能同时实现-淀粉酶分泌和PHAs积累的芽孢杆菌Bacillus sp.CFR-67。高密度发酵后期溶氧量急速降低形成微氧或无氧环境，PHAs合成代谢途径受抑制，积累量降低。

尽管提高搅拌转速、通气量或者供给富氧空气可以保证高密度发酵后期的溶氧水平，但是这些举措增加了PHAs的生产成本。除工农业废水废料外，生活产生的废弃生物质，例如豌豆皮、土豆皮、洋葱皮等[30]生物质资源经酸化后同样可以转化为VFAs，最后用于低成本PHAs的生产。为了解决乙酸、乳酸、富马酸和甲醇富集导致菌株代谢能力降低的问题，人造高密度发酵体系被用于H.bluephagenesis TDHCD-R0的连续传代进化。2.2.3 生物柴油行业廉价碳源生物柴油行业每生产100 kg生物柴油将产生10 kg粗甘油，其中甘油占比75%。连续传代进化同样适用于微生物菌群的优化。近年来也有研究人员尝试将米糠、麦麸等农业废弃物用作PHAs的发酵碳源。

基因工程手段的应用解决了菌株在微氧情况下的适应问题。结果显示，伯克霍尔德氏菌Burkholderia sacchari DSM 17165的PHAs产量占生物量的77%，达到67 g/L。

补料分批发酵技术和连续发酵技术是实现高密度发酵最常用的两个技术手段。当发酵结束后TD01生物量达到90 g/L，PHAs占比74%。

经48 h发酵后，生物量达到112 g/L，其中PHAs占比83.3%。2.3.1 高密度发酵策略PHAs的高密度发酵主要围绕饱-饥策略展开，即通过控制特定营养元素的浓度实现菌株先积累生物量再积累PHAs的多阶段发酵调控。

Li按照葡萄糖︰木糖︰阿拉伯糖=4︰2︰1的比例模拟纤维素水解液验证其用于PHAs生产的可能性。连续传代进化是目前提高菌株耐受性最常用、也是最有效的方法。2.2.1 农业廉价碳源作为农业大国，我国廉价碳源储量丰富。未来的研究方向将主要集中到两个方面：(1)开发低成本物料利用技术。

但是大部分廉价物料经预处理后碳源浓度低、碳源成分复杂多样、毒性化合物存在、生物量低等问题为后期发酵策略的开发提出了新的挑战。例如利用农业秸秆、餐余垃圾和废水废料等废弃物料，降低PHAs发酵生产的物料成本。

如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：发酵，芽孢杆菌，纤维素，乙醇脱氢酶。这表明蔗渣水解液中的毒性物质对细胞积累PHAs影响极大，是未来实现高效利用蔗渣水解液的阻碍之一。

目前NGIB中成功用于PHAs生产的Halomonas sp.TD01是清华大学陈国强团队从艾丁湖筛选获得的耐盐耐碱菌株，在高盐高碱的环境下可以保持PHAs的高效合成。随后研究人员发现在重组Halomonas sp.LS21中表达透明颤菌血红蛋白可以提高细胞在微氧环境中对氧气的摄取能力，发酵结束后生物量达到30.21 g/L，PHB占比75.32%。

可以高效利用北京市小红门污水处理厂废液废料的微生物菌群经过4轮连续传代进化后才适用于江苏省无锡市芦村污水处理厂废液废料，其中PHAs积累量达到菌体生物量的59.47%，远高于出发微生物菌群的PHAs占比(21.5%)。这不但减少了新水及Na Cl的使用量，还同时解决了高盐高碱发酵废水的处理排放问题。但是目前研究结果发现利用粗甘油无法达到PHAs的高产量积累，通过基因工程手段或发酵调控策略提高粗甘油利用率或许是未来实现粗甘油利用的发展方向之一。除此之外，表1中还列举了其他可以用于低成本PHAs生产的碳源，例如石油炼制过程中的甲苯、乙苯、二甲苯等苯系化合物、奶酪加工过程中的乳清，油炸食品加工过程中的废弃橄榄油、棕榈油、葵花籽油等植物油。

例如导入乙醇脱氢酶启动子Padh E的重组E.coli JW2294在微氧环境中实现了7.8 g/L生物量，64%PHB的积累。盐单胞菌TD01已经实现了中试级别的开放式补料分批发酵和连续发酵，这一过程中发酵物料、设备以及补料无需进行灭菌操作，大大减少了灭菌过程的能源消耗。

2.3.4 毒性物质影响毒性物质积累是影响高密度发酵的另一个重要因素。据报道钩虫贪铜菌C.necator DSM 545可以以粗甘油为底物合成PHB，尽管占比可以达到生物量的59.8%，但是生物量只有5.7 g/L。

因此有研究者提出下一代工业生物技术(Next-generation industrial biotechnology，NGIB)，即一种开放式连续发酵生物工业技术。蔗渣经酸水解后除木糖(16.9 g/L)和葡萄糖(9.7 g/L)外还含有糠醛、乙酸等毒性物质。

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